miRNA常见问题,上海bob官方体育生物

一、pri-miRNA、pre-miRNA、miRNA基因名称怎么填写？

初级miRNA（primary miRNA，pri-miRNA）由miRNA基因（通常位于基因间或内含子区域）转录产生（图一）。pri-miRNA长度约为300-1000bp，通常具有5’帽结构、3’polyA尾结构。暂无pri-miRNA数据库，客户必须自行提供序列，基因名称可自行定义，无要求。

pri-miRNA在细胞核内被Drosha核酸内切酶切割，成为单发夹结构的前体miRNA（precursor miRNA，pre-miRNA）。pre-miRNA长度大约为70~90bp，在转运蛋白Esportin-5的作用下由细胞核内转运到细胞质中。pre-miRNA即为NCBI收录的miRNA基因转录产物，命名为MIR21（microRNA 21，NCBI正式名称为全大写字母加数字）。设计pre-miRNA的引物，请填写全大写正式基因名，如MIR21、MIR125A。

pre-miRNA在细胞质中被Dicer核酸内切酶切割成~24bp双链RNA。双链miRNA片段装入RISC（RNA-induced silencing complex）后，miRNA反义链被降解。含有成熟miRNA（microRNA，约20-24bp）的RISC与靶mRNA结合，引起靶mRNA降解或者翻译抑制。设计miRNA的引物，请填写全小写正式名称，如hsa-miR-21-5p、mmu-miR-199b-3p（hsa、mmu为物种前缀，5p、3p为miRNA的方向标识）。

图一、miRNA熟环节[1]。

二、miRNAdna号那里里，需填写表格吗？

例如：MIR21（正式名称）、hsa-mir-21、miR-21均表示pre-miRNA。基因编号可直接搜索NCBI官网（图二），查看Gene ID为406991，非必填。

成熟miRNA是由pre-miRNA剪切产生。基因编号同pre-miRNA，非必填。

图二、NCBI搜miRNA人类基因编码[2]。

三、miRNA参考值方案选取茎环法和加尾法，引物有不同于吗？

茎环法和加尾法均需通过换向录、qPCR两只测试步驟，重要區別在换向录在运行的引物不相同。茎环法在运行stemloop specific primer（茎环特喜欢的人引物）对其开始换向录，加尾法在运行polyT引物对其开始换向录（图三，a）。

qPCR步骤的正向引物相同，均为miRNA特异性引物。但是反向引物不同，茎环法的通用反向引物为茎环的部分序列，加尾法的通用反向引物为polyT引物（图三，b）。miRNA引物设计默认会给出前后引物+茎环引物，如果客户使用加尾法，只需要合成前引物，后引物为试剂盒自带无需设计合成。

图三、miRNA茎环法与加尾法[3]。

四、miRNA引物结构设计时候，有没直接的炼制，必须要该如何检杳？

miRNA引物来设计后，投资者可自动审核前引物。前引物一样提取miRNA的前边15-18bp，在5’端加GC碱风格节Tm值。后引物及茎环字段为紧固字段，不必调查。

五、miRNA实验步骤以及注意事项？

本参考手册为引物设计制作注意情况证明情况证明。测试步凑具体情况见新的产品证明书（新的产品会附送纸书版）。

六、关系方式

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关联性专著：[1]Motameny S, Wolters S, Nürnberg P, Schumacher B. Next Generation Sequencing of miRNAs - Strategies, Resources and Methods. Genes (Basel). 2010;1(1):70-84. Published 2010 Jun 3. doi:10.3390/genes1010070[2]//www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/?term=MIR21[3]Jet T , Gines G , Rondelez Y , Taly V . Advances in multiplexed techniques for the detection and quantification of microRNAs. Chem Soc Rev. 2021;50(6):4141-4161. doi:10.1039/d0cs00609b