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T媒介克隆常見大问题

1. 接入标准体系中T的载体和PCR场面描写的量

    一般来说市场的上各种各样的T载体✃的包装浓度为20-50ng/ul。常规3kb左右的T载体在连接体系中加入总量为50ng-100ng，载体和片段摩尔比一般为1 ：3。比如，一个500bp片段连接到3kb的T载体中，T载体加入量60n๊g，则500bp片段应该为30ng。

2. PCR细节描写的品质

     联系方式网络体系中PCR段落的品质对联系方式取得成功起着的关键影响ꦫ💃。

1）PCR段落的尺寸各种不同🌄对拼接的特殊要求也各种不同，过高就是较短的PCR段落须得调🅷节拼接保障体系；

2）PCR电影片段的含量和特喜欢的人要较高；

3）收售后的PCR细节描写氨水氧化还原电位要好，特意是间距较长的细节描写，氨水氧化还原电位不许过低，PCR物品做胶收售会大大减少细节描写氨水氧化还🥃原电位。

3. pad未菌斑也是越来越少

 ꩵ    接到T质粒后，一般的要-20℃保护。要暂时性内并不能食用完，提倡将质粒散装保护。在在常温和4℃摆放在太久，T质粒会出現尾部T找不到，质粒吸附等情况下。

iPad是没有菌斑或许是少，除T载体损坏外，其它原因有：

1）对接风险管理体系中的对接酶及Buffer；

2）后部含A的PCR场面效果，例如含量、盐浓度各种非特异朋友；

3）感觉到态細胞的质理

4. 连入长短较短的PCR情节时，会经常出现菌斑过度，也是过少的条件

     在不一样周转量的原因下，DNA电影细节描写总长短点，其摩尔数就是越大，这也是无数小的PCR电影细节描写极易联系，冒出一些菌斑的🎐原因。比如DNA电影细节描写摩尔数过大，就是争夺紧密联系非常有限的T膜蛋白，以至于联系学习效率减低，还是会会使菌斑减低。，因此，对待联系纯虚函数电影细节描写时，其摩♉尔数不允许过大。

5. 联接段长度较长的PCR场面描写时，常会产生菌斑较少或长不大斑等现象

     常用连入时，当PCR情节总长度超过2kb时，普通菌斑就发生下跌前景。PCR情节总长比越大，菌斑就愈少。不错🐓采用一些的办法操作：

1）加长连入時间；

2）提供质粒和场面描写的产品，打比方，场面描写会帮�💫�特情人单一纯粹条带，场面描写没办法有可降解未来趋势，质粒和场面描写的饱和度和渗透压要高；

3）可不可以试过修正媒介和场面描写摩尔比，这种修正为1 ：1等。